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1、劃不出單個(gè)菌落的原因:
(1)平板上有過(guò)多的水分;
(2)劃線時(shí)接種環(huán)未經(jīng)反復(fù)灼燒;
(3)多區(qū)劃線,三區(qū)或四區(qū)劃線。
2、涂布和傾注的區(qū)別:
涂布利于觀察,但由于涂布棒上會(huì)帶有少量的菌液,可能影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性;傾注更為準(zhǔn)確,但不利于觀察菌落的狀態(tài)。
對(duì)霉菌計(jì)數(shù)來(lái)說(shuō),涂抹法有以下幾方面優(yōu)越于傾注法:
①培養(yǎng)出的霉菌菌落數(shù)較多;
②培養(yǎng)所需的時(shí)間較短;
③霉菌孢子、菌落形態(tài)特征發(fā)育完全,便于鑒定。
這是因?yàn)榻^大多數(shù)霉菌是好氧的,在培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)快,發(fā)育好,而混在培養(yǎng)基中發(fā)育就受影響,而且在培養(yǎng)基傾注時(shí)霉菌孢子易受熱損傷。
3、培養(yǎng)基的選擇:
培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料和檢驗(yàn)?zāi)康膩?lái)確定。培養(yǎng)基按微生物的種類可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基和霉菌培養(yǎng)基等四類。常用的細(xì)菌培養(yǎng)基有營(yíng)養(yǎng)肉湯和營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;常用的放線菌培養(yǎng)基為高氏1號(hào)培養(yǎng)基;常用的酵母菌培養(yǎng)基有馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基和麥芽汁培養(yǎng)基;常用的霉菌培養(yǎng)基有馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)瓊脂培養(yǎng)基和察氏培養(yǎng)基等。
4、培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題:
(1)滅菌溫度要嚴(yán)格控制,按照要求滅菌,尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高,過(guò)高會(huì)導(dǎo)致糖分焦化,影響質(zhì)量;
(2)瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會(huì)破壞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分;
(3)培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌,反復(fù)滅菌也會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)成分的破壞;
(4)含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后,要搖勻。
5、培養(yǎng)溫度:
(1)細(xì)菌:36-37℃培養(yǎng)
(2)真菌類:25-30℃培養(yǎng)。
6、革蘭氏染色方法注意事項(xiàng):
染色時(shí)間的掌握、沖洗的方法。
7、最適計(jì)數(shù)范圍:
細(xì)菌計(jì)數(shù)較為簡(jiǎn)單,霉菌計(jì)數(shù)問(wèn)題比較多見(jiàn)。因?yàn)槊咕溆涉咦雍途z組成,相當(dāng)擴(kuò)散,在直徑9cm的平皿里,菌落數(shù)稍多就相互交叉重疊,影響計(jì)數(shù),但數(shù)量太少又會(huì)產(chǎn)生較大的誤差,因此選擇適當(dāng)?shù)南♂尪扔?jì)數(shù)是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。
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